y氰基T酷（GABA）广泛存在干动植物体内，是一种0Mo茶叶网

中枢神经系统的抑制性神经递质，具有降低血压、增强脑细0Mo茶叶网

胞代谢、促进长期记忆等生理活性作用1“：谷氨酸脱箍酶0Mo茶叶网

（GADl可以专一地催化卜谷氨酸脱揎转变成GABA。据报道，0Mo茶叶网

茶叶具有较高的6ADib力”1。据中国农业科学院茶叶研究所0Mo茶叶网

研究，茶叶中6AD活性因品种不同而有所差异，从而导致不0Mo茶叶网

同品种茶叶中GABA含量不同“1。但目前针对不同品种茶树0Mo茶叶网

中GABA舍量和GAD活性之间关系而展开的相关研究报道较0Mo茶叶网

少。GADit力的测定方法有两条途径：【1）测定co,的生成：0Mo茶叶网

（2）irtGABA的定量测定。其中对GABA的定量测定由于其方0Mo茶叶网

便性和准确性，成为GAD活力测定的首选方法。GABA的测0Mo茶叶网

定主要有酶法、色质联用法、柱层析荧光测定法、毛细管电0Mo茶叶网

泳法、毛细管气相色谱法、高效液相色i法、氨基酸自动分0Mo茶叶网

析仪及电泳法等…，但这些方法大多用于医学领域，且价格0Mo茶叶网

昂贵，F适于大量的定量分析。为此，本研究以13份不同茶0Mo茶叶网

树品种为对象，采用纸层析法定量测定，探讨各品种茶叶中0Mo茶叶网

GABA含量和GADi舌性差异，同时基于GAD,Z"it差异对各品0Mo茶叶网

种进行聚类分析，旨在筛选特异性茶树品种，为GABA茶的0Mo茶叶网

生产提供科学依据。0Mo茶叶网

1材料与方法0Mo茶叶网

i.i实验材料0Mo茶叶网

1.1 1 #tj式茶叶实验所用的13个茶树品种茶树鲜叶采自0Mo茶叶网

华南农业大学实验茶园，采摘标准为一芽二叶、0Mo茶叶网

1 1 2主要试剂y，氯基丁醢标准品、备氨酸标准品、茚0Mo茶叶网

三酮、正丁醇、泳乙醇、硫酸铜、乙醇、磷酸缓冲液、口巯0Mo茶叶网

基乙醇，以上试剂均为市购。0Mo茶叶网

11 3主要仪器0Mo茶叶网

层析缸、移液棺：购自广州市精科化学仪器有限公司0Mo茶叶网

AB204-N型电子天平：上海梅特勒-托利多仪器有限公司0Mo茶叶网

DK-8D电擤恒温水浴锅：北京市永光明医疗仪器厂0Mo茶叶网

RE-52A旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂0Mo茶叶网

SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限责0Mo茶叶网

任公司0Mo茶叶网

CR22GII高速冷冻离心机：日本日立公司0Mo茶叶网

UV-2800紫外分光光度计：上海龙尼柯仪器有限公司0Mo茶叶网

雷磁口H计：上海精科仪器公司0Mo茶叶网

DHG-101电热恒温干燥箱：江苏吴江市新俺隔烘0Mo茶叶网

箱制造厂0Mo茶叶网

1 2蜜验方法0Mo茶叶网

1.2.1 GABAmli定0Mo茶叶网

1 211样品处理0Mo茶叶网

分别称取备品种鲜叶、真空处理3h后的茶叶各0Mo茶叶网

10g.碾磨后迅速加入100ml沸水浸提ih后抽滤。旋0Mo茶叶网

转蒸发一定时间后加70%2醇静置30min，置于离心0Mo茶叶网

机中，以SOOOr/min离心5min.上清液即为GABA提取0Mo茶叶网

液。0Mo茶叶网

1 2 1 2纸层析法测定茶叶#GABA含量0Mo茶叶网

采用国产新华3号滤纸，吸取8 yl#品，点样线距0Mo茶叶网

滤纸边缘2.5cm，样品间距2.Ocm。将点样后的滤纸条0Mo茶叶网

放在装有展开剂的层析缸中层析。用喷雾法向层析纸0Mo茶叶网

均匀喷i290.4%茚三酮，于电热恒温千燥箱中90。C烘100Mo茶叶网

miri.将与标准品位置一致的斑点剪下，用V（lg/L硫0Mo茶叶网

酸铜）V（体积分数750h乙醇）=2：38的洗脱液洗脱。0Mo茶叶网

520 nm处比色测定。根据张晖等的方法计算GABA的含0Mo茶叶网

量…0Mo茶叶网

1 2 2鲜叶中GAD活性测定0Mo茶叶网

称取i.Og茶叶鲜叶。研磨成均浆，在4"C条件下0Mo茶叶网

加入10ml、pH5.8的磷酸缓冲液和30pip巯基乙醇，0Mo茶叶网

转人离心管，置于离心机内在4口C、13000r/min的条0Mo茶叶网

件下离心10min.上清液即为粗酶提取液。取1mI底物0Mo茶叶网

溶液（i%Glu, pH 5.8）与iml粗酶液于40"C的水浴中反0Mo茶叶网

应2h后，转入沸水中煮i弗5min，离心得上清液。用纸0Mo茶叶网

层析法测定GABA的生成量，以每30min生成1umoI的0Mo茶叶网

GABA作勾6AD的1个酶活单位…0Mo茶叶网

2结果与分析0Mo茶叶网

21展开舸的垃择0Mo茶叶网

关于纸层析法定量测定氨基醅，不同研究者使0Mo茶叶网

用了不同的展开剂与配比，但针对GABA分离的报道0Mo茶叶网

较少。本文选择了3种展开剂配方。即V（正丁醇）0Mo茶叶网

：V（球乙醛）V（水）=7 3=1.v（正丁醇）：V（冰乙0Mo茶叶网

酷）iV（水）=4:3：1和V（正丁醇）V（冰乙酷）V0Mo茶叶网

（水）=41 1.其中，用展开剂V（正丁醇）v（冰乙0Mo茶叶网

醢）iV（木）=7:3：1的分离效果不理想，而展开剂V0Mo茶叶网

（正丁醇）：V【冰乙醚）：V（水）=4：1 1虽然分离效果0Mo茶叶网

2 2自然条件下不同茶树品种GABA含量丑GAD0Mo茶叶网

目性分析0Mo茶叶网

不同茶树品种鲜叶的GABA含量及GAD活性的测定0Mo茶叶网

☆果见表1茶树中6ABA含量殛6AD活性固品种不同0Mo茶叶网

i异，在所选13个茶树品种中，福云六号鲜叶的GABA0Mo茶叶网

}量高于其他品种，为5 44mg/g.而黄枝香鲜叶GAD0Mo茶叶网

i性最高，为2.049pmol/30min.对所选品种鲜叶的0Mo茶叶网

;ABA含量和GAD活性进行显着性方差分析可知鲜叶0Mo茶叶网

jABA含量和GAD活性均呈极显着差异（F> Fom）。0Mo茶叶网

2 3聚类分析0Mo茶叶网

基于6AD活性的差异对1 3个茶榭品种鲜叶进行聚类分0Mo茶叶网

析，得到聚类分析图（囤2）。当相似系数为0 1 3时，13个0Mo茶叶网

品种划被分为3大类群（见表3）。其中，第1类包括3个pti0Mo茶叶网

种，此类品种GAD活性均较高，均值为1.981 ymol/30min;0Mo茶叶网

第II类包括2个品种，具有较高的GAD活性，均值为0Mo茶叶网

1.231”mol/30min;第川类包fS8个品种，此类品种中GAD0Mo茶叶网

活性较低，均值，J0.653 pmol/30min。0Mo茶叶网

从聚粪分析结果发现，第1娄茶树品种都为大叶种：第0Mo茶叶网

ii类的2个茶树品种中，枝兰香为大叶种，福云六号为福鼎大0Mo茶叶网

白茶和云南大叶种的杂交。GAD的活性虽不及第1类，但也0Mo茶叶网

较高。而第…类茶树品种为中小叶种，GADi活性均较低因0Mo茶叶网

此，不同茶树品种间，大叶种茶树的GAD活性一般高于中小0Mo茶叶网

叶种的。0Mo茶叶网

3小结和讨论0Mo茶叶网

茶树中GABA含量和6AD活性受多方面因素的影响，其0Mo茶叶网

中品种基因型起着决定作用。本研究结果表明，不同茶树0Mo茶叶网

品种间6ABA含量和GAD活性存在明显差异，鲜叶6ABA含0Mo茶叶网

量、真空3h处理后的6ABA含量和6ADi活性均呈极显着差异0Mo茶叶网

{F> Fo0 1）。13个茶树品种可分为3粪，其中第1类包括3个大0Mo茶叶网

叶种，其6ADi活性均较高，均值为1.981 ymol/30min;第II0Mo茶叶网

类次之：第…类包括8个中小叶种，此类品种中GAD活性均J0Mo茶叶网

较低。由于茶叶中GAD活性和GABA舍量密切相关，因此，0Mo茶叶网

GADi活性高的品种6ABA富集能力亦强。从本研究可发现，0Mo茶叶网

从大叶种茶树品种中更易筛选出高GADi活性茶iH品种，从而0Mo茶叶网

为富GABAIIJ能性茶叶生产提供了品种选择依据。0Mo茶叶网

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